粘粒载体：（1）具有λ噬菌体的特性（cos位点）：被包装后能高效转化E.coli（2）具有质粒载体的特性：自主复制，带有抗性标记，易于选择阳性克隆（3）高容量的克隆能力：可载高达45kb外源DNA（4）因不含λ的基因，故不会裂解（5）便于定向克隆
何为人工染色体载体？
人工构建的含有天然染色体基本功能单位的载体体系。
酵母人工染色体（YAC)
①存在高比例的嵌合体，即一个YAC克隆含有两个本来不相连的独立片段；
部分克隆子不稳定，在转代培养中可能会发生缺失或重排；
难与酵母染色体区分开，因为YAC与酵母染色体具有相似的结构；
操作时容易发生染色体机械切割；
转化效率低。
细菌人工染色体（BAC）
易于用电击法转化E.coli（转化效率比转化酵母高10-100倍）；
超螺旋环状载体，易于操作；
F'质粒本身所带的基因控制了质粒的复制；
很少发生体内重排。
（3）其它类型的人工染色体（PAC和TAC）
－P1人工染色体(P1ArtificialChromosome，PAC）
－植物可转基因人工染色体
常用的基因克隆方法有哪几类？各有什么特点？实际应用中有什么要求？
以已知序列为基础的基因克隆方法
以分子标记连锁图谱为基础的基因克隆方法
以人工突变体为基础的基因克隆方法
以表达差异为基础的基因克隆方法
利用生物大分子之间相互作用的基因克隆方法。
5、什么是基因文库？基因文库有哪两类？
6、用于植物遗传转化的生物载体有哪两类？
（1）病毒载体：
?单链RNA植物病毒
?单链DNA植物病毒
?双链DNA植物病毒
（2）质粒载体：
?Ti质粒（根瘤土壤杆菌）
?Ri质粒（毛根土壤杆菌）
7、根癌农杆菌为何能诱发植物冠瘿瘤形成？
8、Ti质粒的主要结构区域和功能。
（1）毒性区（vir区）：激活TT－DNA的转移
（2）T－DNA区：侵染植物时，从Ti质粒上被切割，转移到植物细胞中，带有与肿瘤形成
有关的基因
（3）质粒接合转移区（Con区）：存在与细菌间进行接合有关的基因
（4）质粒复制起始区（Ori区）：保证Ti质粒进行自我复制。
（5）冠瘿碱分解位点
9、T-DNA的结构和功能。
结构：（1）一般在23kb左右，都含有一段8kb左右的核心区（2）在T-DNA的5’端和3’端都有真核表达信号，如TATA-box、AATAA-box及poly(A)n等（3）无内含子（4）含致瘤基因（激素合成有关的基因）（5）含冠瘿碱合成代谢基因（6）左边界、右边界（RBandLB)序列（对T-DNA转移的重要性：右边界更保守）
功能：侵染植物时，从Ti质粒上被切割，转移到植物细胞中，带有与肿瘤形成
有关的基因
Vir区的主要结构和功能。
总长度大约35kb，由7个互补群组成，分别命名为VirA、VirB、VirC、VirD、VirE、VirG和VirH
VirA
结构：单一基因，2.8kb，编码1条92kDa的多肽，为一种结合在膜上的受体蛋白（周质结构域，接头结构域，激酶结构域，接收器结构域）；VirA蛋白C端保守区可以进行ATP特异性自发磷酸化（磷酸化的位点在474位组氨酸残基上，形成稳定的1-磷酸组氨酸和3-磷酸组氨酸）；磷酸化的VirA蛋白能激活VirG蛋白（通过转移其磷酸基团至VirG蛋白的一个天冬氨酸残基）
功能：帮助植物细胞接受植物信号分子，启动毒性区表达
VirG
结构：1.2kb，为单拷贝基因，编码DNA结合活化蛋白；位于VirG蛋白N端第52位的天冬氨酸可以被磷酸化形成酰基磷酸（VirG蛋白必须在VirA蛋白存在下才能够特异性地
磷酸化）
功能：转录因子。可以特异地结合到VirB、C、D、E、G和H操纵子的5’端非转录区，激活转录
VirB
结构：至少编码11个开放阅读框架，编码膜转运蛋白。
蛋白质的N端带有信号序列。这种序列可以帮助蛋白质在膜上的运输，使其独立地或借助类似分子伴侣受体的帮助穿过内膜。
功能：可能是通过改变细菌细胞膜的结构，产生一个膜穿透通道，使T-DNA转移到细菌细胞外；也可能作为T-DNA复合物的组成成分。
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